Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1同型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到肝细胞内胃溃疡到注意到1同型肾病医学病征的成果率在幼儿时期就有极佳的阐述，多个肝细胞内胃溃疡感染性的幼儿中都有70%在血浆转换后10年内肺结核肾病，而随访15年的幼儿这一比率增大到84%。相对来说之下，分之二医学1同型肾病一半以上的同型1同型肾病的发病机制还并未得不到充分的学精研究。

更加多的人开始运用于分期的系统来度量1同型肾病的成果：变异在注意到多种肝细胞内胃溃疡时转到第1早先，注意到血压异常时转到第2早先，注意到病征时转到第3早先。一些多发肝细胞内胃溃疡感染性的变异，在1期和2期，成果极快，并蓬勃发展为发病的1同型肾病。我们早先阐述了一组在首次检测到多种肝细胞内胃溃疡比对后数10年无肾病的极太快成果者，这组病人人数少，但特性非常确切。随后，我们挖掘出肝细胞内胃溃疡特异性CD8+T细胞内重排在成果很太快的病人中都大体不普遍存在，但在近期发病和长期以来普遍存在的肾病病人中都很容易检测到。这可能断定，与成果病人相对来说，这些病人胃溃疡重排的调节增强。

早期学精研究断定，尽管调节性T细胞内(Treg)数量正常人，但肾病病人普遍存在一些机能缺点，其中都仅限于对IL-2的重排能力增大。此外，肾病病人中都的现象CD4+T细胞内可能对调节更加具抵抗性，表现为现象T细胞内的选择性减弱，自然归因于的Treg和微外归因于的正向Treg，以及免疫经历的CD4+T细胞内中都IL-2重排减弱。本学精研究的借以是阐述了CD4+调节性T细胞内(Treg)在一小群极很太快成果者中都的特性，他们的平均比率为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX学精研究是一项以人群基础上的纵向学精研究，在21岁以下患病的病人子女中都检查1同型肾病的危险诱因。我们早先阐述了长期以来很太快成果者的特性，他们持续保持多重肝细胞内胃溃疡感染性多达10年，但并未注意到肾病的医学病征，太快性或非变性胃溃疡。随后，10名继续持续保持无肾病并不愿提供大量血液比对的很太快成果者纳入T和B细胞内机能深入研究。在现早先的学精研究中都，8名太快成果者(SP组)，中都位比率43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的肝细胞内胃溃疡感染性。所有的参与者都处于1同型肾病成果的1期，尽管一些人随后无法控制了肝细胞内胃溃疡对某些免疫的感染性重排，然而，一名病人已经处于2期数6年，但并未注意到医学病征，一名病人被诊断为肾病，该受试者72岁，在捕获测试比对时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究中都对该小分子完成了单独深入研究报告。分离外周血单个重排器细胞内(PBMCs)，采用多值流式细胞内精和T细胞内选择性测试深入研究报告小分子中都Treg的频率、表现同型和机能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类核对、表征和复出)完成无监督聚类深入研究，深入研究报告Treg表现同型。

结果：与心理健康小分子相对来说，来自太快成果微的失忆CD4+T细胞内的监督聚类结果显示，激活的失忆CD4+ Treg频率增大，与选择性作用正向的TNFR相关肽(GITR)隐含增大有关。一名HbA1c升高的病人与成果很太快者和匹配的对应以组相对来说，Treg谱有所不同。机能深入研究断定，与心理健康小分子相对来说，来自很太快成果微的Treg依赖性的CD4+现象T细胞内选择性明显损伤。表现为对现象CD4+T细胞内CD25和CD134隐含的选择性增大。

平面图1 深入的表现同型深入研究结果显示，CD4+Treg亚同型在太快成果阐述符中都增大。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标示物隐含核对出10个元簇:失忆T细胞内_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞内;HLA-DR + GITR +失忆T细胞内;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)运用于9个不同Treg标示生成的10个元簇的MST。每个数据流代表一个协同(100个协同)，更加大的元协同(10个元协同)在数据流组周围上色。每个数据流中都的饼平面图暗示单个标示的隐含最高级别。(b)每个元聚类的热平面图，以结果显示整微标示隐含。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)生成平面图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对重元素为每个metacluster木箱新线平面图(重元素> 0.05%)断定为HD和SP组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞内(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞内(l)。蓝色格子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 运用于CITRUS的预测模同型证明，Treg频率的增大是成果很太快的徽标。分级门控(a - f)和柑橘深入研究(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的不同。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的代表性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含完成分离，模拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(小点)和SP(蓝点)组以及小分子SP 606(蓝色)中都CD25+ cd127的频率汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控偏序的木箱新线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)油菜簇折叠由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，箭头突出的簇被标识为SP和HD阐述符彼此之间的不同。(j)木箱新线平面图结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)组中都，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相对重元素(比率)。(k)直方平面图结果显示每个簇的表现同型(粉红色)和Treg标示相对隐含与背景隐含(黄色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。背景与所有其他簇中都标示的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图3 与心理健康献血者相对来说，成果很太快者失忆treg的GITR增大。每个失忆CD4+T细胞内元簇(失忆T细胞内_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞内;HLA-DR + GITR +失忆T细胞内;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个隐含标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)阐述符的隐含热平面图(sp606不仅限于在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR隐含串联，结果显示直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有小分子仅限于，p< 0.05(黄色)小分子SP 606和匹配的HD不仅限于在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR隐含，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(蓝色)串联，结果显示直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图4 来自很太快成果的CD4+ treg细胞内管控现象CD4+T细胞内的能力增大。SP组用黄色的新线和格子暗示，HD组用黑色的新线和格子暗示，蓝色的新线/格子暗示小分子sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内完成分选。CD4+CD25−(应以答者)被标示为CFSE, Treg按观察的比率溶液。用抗CD3 /28微珠激活细胞内，培养3当晚完成流式细胞内精检测。(a-d)与CD4+应以答者相对应以的treg培养(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应以答者培养。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE选择性比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性比率。运用于感染性对应以(激活的响应以细胞内则有treg)计算选择性比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 现象CD4+T细胞内对很太快成果的T细胞内激活的选择性更加敏感。SP组用黄色的新线和格子暗示，HD组用黑色的新线和格子暗示，蓝色的新线/格子暗示小分子sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内完成分选。CD4+CD25−(应以答者)被cfsel标示，treg按观察的比率溶液。用抗CD3 /28微珠激活细胞内，培养3当晚完成流式细胞内精(CD25反染)和细胞内因子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606应以答者共同培养。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE选择性三份(b)。(c,d) CD25选择性三份(c)和CD134选择性三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养中都的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们推论的论点是，来自很太快成果子的激活失忆CD4+Treg在GITR隐含中都得不到了扩展和多样化，务实了进一步学精研究Treg在1同型肾病风险变异中都的异质性的必要性。

书名出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28